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        為什么我們要用瓊脂糖凝膠做電泳載體?

        發布時間:2022-01-21瀏覽次數:194返回列表

        常用的電泳實驗載體:

        1、醋酸纖維素薄膜電泳 :醋酸纖維素薄膜電泳是以醋酸纖維素薄膜為支持物,它是纖維素的醋酸酯,由纖維素的羥基經乙?;瞥?。

        2、 瓊脂糖凝膠電泳 :瓊脂糖凝膠電泳是一種以瓊脂糖凝膠為支持物的凝膠電泳。

        3、聚丙烯酰胺凝膠電泳 :聚丙烯酰胺凝膠是由單體丙烯酰胺和交聯劑又稱為共聚體的N,N’-甲叉雙丙烯酰胺(簡稱Bis)在加速劑和催化劑的作用下聚合交聯成三維網狀結構的凝膠,以此凝膠為支持物的電泳稱為聚丙烯酰胺凝膠電泳(簡稱PAGE)。

        4、等電聚焦電泳 :等電聚焦電泳是利用具有pH梯度的電泳介質來分離等電點(pI)不同的蛋白質的電泳技術。

        瓊脂糖凝膠電泳其分析原理與其它支持物電泳的主要區別是:它兼有“分子篩”和“電泳”的雙重作用。瓊脂糖凝膠具有網絡結構,直接參與帶電顆粒的分離過程,在電泳中,物質分子通過空隙時會受到阻力,大分子物質在泳動時受到的阻力比小分子大,因此在凝膠電泳中,帶電顆粒的分離不僅依賴于凈電荷的性質和數量,而且還取決于分子大小,這就大大地提高了分辨能力。

        瓊脂糖系天然的瓊脂加工制得,天然瓊脂是一種多聚糖,主要由瓊脂糖(約占80%)及瓊脂膠組成。瓊脂糖是由半乳糖及其衍生物構成的中性物質,不帶電荷。而瓊脂膠是一種含硫酸根和羧基的強酸性多糖,由于這些基團帶有電荷,在電場作用下能產生較強的電滲現象。所以常用于血清蛋白、血紅蛋白、脂蛋白、糖蛋白、乳酸脫氫酶、堿性磷酸酶等同工酶的分離和鑒定,為臨床某些疾病的鑒別診斷提供了可靠的依據。與免疫化學反應相結合發展成為免疫電泳技術,用于分離和檢測抗原??蓪δ壳俺S玫沫傊沁M行某些修飾,如引入化學基團羥乙基,則可使瓊脂糖在65℃左右便能熔化,被稱為低熔點瓊脂糖。該溫度低于DNA的熔點,而且凝膠強度又無明顯改變。以此為支持物進行電泳,稱為低熔點瓊脂糖凝膠電泳,主要應用于DNA研究。如DNA鑒定,DNA限制性內切酶圖譜制作等,為DNA分子及其片段分子量測定和DNA分子構象的分析提供了重要手段。

        總結瓊脂糖凝膠電泳的優點如下:

        1. 瓊脂糖凝膠電泳操作簡單,電泳速度快,樣品不需事先處理就可以進行電泳。

        2. 瓊脂糖凝膠結構均勻,含水量大(約占98%~99%),近似自由電泳,樣品擴散較自由電流,對樣品吸附極微,因此電泳圖譜清晰,分辨率高,重復性好。

        3. 瓊脂糖透明無紫外吸收,電泳過程和結果可直接用紫外光燈檢測及定量測定。

        4. 電泳后區帶易染色,樣品極易洗脫,便于定量測定。制成干膜可長期保存

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